利用血細胞計數板進行細胞計數：

像數1，2，3那樣簡單

許多關于細胞利用的一些生物學應用，如微生物學、細胞培養(yǎng)、血液檢查等要求我們在實驗中確定細胞的濃度。

細胞計數非常簡單，需要有一個計數板，稱為血細胞計數板，或 血細胞計數器。19世紀法國解剖學家louis-charles malassez發(fā)明了這種血細胞計數板。血細胞計數板是由一片較厚的特制玻片構成，中間有一個垂直線網格。網格的尺寸是給定的，因此每條線覆蓋的區(qū)域是已知的，這樣就可以對一定體積內的溶液中的細胞數量進行計數，為后期的 血細胞檢測 奠定基礎。

*為常見的血細胞計數板類型的中部有一個“h”形結構，上面有兩個像鏡子一樣拋光的網格表面，并可在上面加上外罩。

加載血細胞計數板

開始進行計數之前，用擦鏡紙拭去灰塵顆粒，確保血細胞計數板及其蓋玻片處于潔凈狀態(tài)。安裝在血細胞計數板上的蓋玻片是特制的，明顯厚于傳統的顯微鏡蓋玻片， 這是因為它必須能夠克服液滴的表面張力。

確保在加載細胞懸液之前，先將蓋玻片放置在計數表面，然后將吸液頭和樣本放進其中的一個v型孔中，并小心地擠出樣本。利用毛細管作用充填蓋玻片下部的區(qū)域。必須放入足夠的液體以便覆蓋整個鏡片的表面，通常需要大約10ul，但不要溢出表面。您可以在一臺血細胞計數板中加載兩個樣本，每個樣本進入兩個網格。

將加載完的血細胞計數板放置在顯微鏡臺上，然后將計數格在低倍鏡焦距中顯示。將樣本靜置幾分鐘，不要移動蓋玻片，以免產生氣泡導致計數困難。

在血細胞計數板上進行血細胞計數

一個血細胞計數板的整個網格包括9個方格，每個方格的面積為1mm2。 血細胞計數 板的中心區(qū)域有25個較大的方格，每個大的方格中又包含16個小方格。當進行計數時，僅對那些位于大方格兩側的各行中的細胞進行計數，以避免重復計數。懸液必須稀釋到足夠的程度，這樣，細胞或其它顆粒才能均勻分布，不會再網格中相互重疊。

為了判斷細胞的活性， 通常采用一種特殊的染色劑（如用臺盼藍稀釋樣本）。這種染色方法，又稱為染色排除法，選用一種重氮染料，它可以進入死細胞的細胞膜，將它們染成藍色；而這種染料不會被活細胞的細胞膜所吸收，由此，活細胞不會被染色。當在顯微鏡下進行觀察時，死細胞呈深藍色。

為了進行計數，需要確定在所選的方格內識別目標細胞類型并計算系統化細胞計數所需的放大倍數，這樣總計數大約為100個，這是統計學顯著性計數所需的*低細胞數量。

對于較大的細胞，您只需對角上的四個和中間的一個大方塊中的細胞進行計數即可。對于小細胞的濃懸浮液，您可能希望對中間方格的4個外部和中間的方格進行計數，或進一步稀釋懸液。

切記！如果存在細胞與邊線重疊的情況，若與頂部或右側邊線重疊，其計算在“內”；若與底部或左側邊線重疊，其計算在“外”。

如果中間區(qū)域和每個角落的方格為1 mm x 1 mm = 1 mm2:每個方格的深度為 0.1 mm。每個方格在該深度的*終體積為100nl。

一旦您獲得了細胞計數的總數，可以通過下列公式計算細胞濃度：

細胞總數/ml＝統計的細胞總數×（稀釋因子/方格數）×10，000細胞/ml

因此，如果您用1:1的臺盼藍對樣本進行稀釋，并在4個角落的方格加上中間大方格中統計得到325個細胞，則每毫升（ml ）中細胞總數=：

325個細胞 × [2(稀釋因子)/5個方格] × 10，000 細胞/ml = 130 ×104 細胞/ml

如果您想知道原先樣本中有多少細胞，只需用總的樣本量乘以細胞濃度即可。

例如，如果您原先的樣本量是5ml，則您的樣本中總計擁有=:

130 ×104細胞/ml × 5ml = 650×104個細胞